生命具有廣闊的時間和空間的尺度，從時間維度上，須臾一瞬，歷經(jīng)飛秒（fs）尺度的原子反應(yīng)（1fs=10^-15s），到人壽百年，橫跨數(shù)十個數(shù)量級。從空間維度上，從原子尺寸？（1？=10^-10m）到人體身高平均一米七，我們正走在逼近認知尺度極限的探索道路上。作為結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究者，我們希望從微觀的原子水平到宏觀的個體尺度上，去窺探生命的奧秘，也必將伴隨著無數(shù)荊棘和挑戰(zhàn)。

 

　　無論探測分子，細胞和個體結(jié)構(gòu)，都需要很先進的手段和技術(shù)。生物學(xué)跟物理學(xué)、化學(xué)、計算機、工程技術(shù)等交叉學(xué)科的緊密配合突破了現(xiàn)有的瓶頸，迎來了結(jié)構(gòu)生物學(xué)長足的發(fā)展，回答了許多困擾已久的科學(xué)問題。

 

　　實驗的數(shù)據(jù)，過去對它進行計算機模擬，現(xiàn)在又有人工智能或者叫大數(shù)據(jù)系統(tǒng)，希望有一天能做到用于電子虛擬人體，這是整個結(jié)構(gòu)生物學(xué)的大方向。

 

　　結(jié)構(gòu)生物學(xué)的大方向：實現(xiàn)電子虛擬人體

 

　　我?guī)ьI(lǐng)的課題組做尺度比較小的東西，包括病毒病原體、新發(fā)再發(fā)傳染病病原體的研究。我們研究組主要在這個領(lǐng)域里面進行研究，我們團隊很年輕，2018年研究組成果出現(xiàn)井噴，包括2篇Science，和許文清教授合作1篇Nature，以及19年剛剛在線發(fā)表的Cell文章。這些工作積累了很長時間，湊巧到去年發(fā)表了，這些成果都是屬于這批年輕人的。

 

　　病毒有三個科學(xué)問題：

 

　　第一個科學(xué)問題是病毒為代表的病原體，如何能夠跟宿主細胞的受體識別并相互作用，然后入侵宿主細胞。

 

　　第二個科學(xué)問題是轉(zhuǎn)錄與復(fù)制。病毒進入宿主細胞，將其基因組釋放到宿主細胞里面，病毒基因組如何跟宿主基因組整合，然后進行轉(zhuǎn)錄復(fù)制。這個工作我們是從非典事件開始，以冠狀病毒為研究體系，做了深入的研究。

 

　　第三個問題是病毒在宿主細胞里面進行轉(zhuǎn)錄復(fù)制之后，如何裝配起來形成一個病毒顆粒，然后怎么釋放出去的？

 

　　我今天給大家講第三個問題，病毒轉(zhuǎn)錄復(fù)制以后如何裝配的？

 

　　以皰疹病毒為例，過去十幾年我們實驗室解析了二三十個完整病毒的原子水平結(jié)構(gòu)，不光有病毒的結(jié)構(gòu)，還有病毒和受體復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，病毒和抗體的復(fù)合物的結(jié)構(gòu)。這些結(jié)構(gòu)讓我們從原子水平上對病毒的作用機制有一定的了解，為進一步研究它的作用機制和藥物的開發(fā)提供了堅實的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。

 

　　那么，皰疹病毒的衣殼是什么樣的結(jié)構(gòu)？它的Architecture（構(gòu)造）是什么樣的？

 

　　大家知道皰疹病毒、水痘、口腔皰疹、帶狀皰疹，這些都是跟人們生活密切相關(guān)的、令人煩惱的病毒。病毒有兩種狀態(tài)，一種叫裂解期，還有一種叫潛伏期。病毒侵入人體以后，這兩種狀態(tài)都有，免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)出問題的時候，嘴上或者身體其他部位長出皰疹，這個時候就是活躍期。狀態(tài)好它就消下去了，這就是潛伏期。正因為它會潛伏，所以很難根治，往往人們得了一次皰疹病毒以后，它就可能跟你一輩子。在國際上很多很多研究組，都在研究各式各樣的皰疹病毒，皰疹病毒研究隊伍非常之大，但是到現(xiàn)在還沒有根治皰疹的藥。

 

　　皰疹病毒從結(jié)構(gòu)水平上來講比較特殊，它特別大，直徑超過200納米。結(jié)構(gòu)有四層。如下圖：

 

　　外面一層是帶有糖蛋白的囊膜。

 

　　第二層是蛋白層，叫Tegument，它有OuterTegument（外部的），還有InnerTegument（內(nèi)部的），里面相當(dāng)復(fù)雜。

 

　　第三層，綠顏色是比較均一的正二十面體，有一個通道，這個通道叫Portal，是基因組進出的地方，原則上來講，皰疹病毒不是一個嚴格的正二十面體，而是一個帶有瓶口的正二十面體。

 

　　第四層是雙鏈的DNA基因組。

 

　　過去的6年，由于冷凍電鏡技術(shù)的突破，人們能夠從原子水平上解析很多以前無法解決的復(fù)雜結(jié)構(gòu)，大家看到這一系列的結(jié)構(gòu)，一直到DengueVirus（登革熱病毒）這么大的結(jié)構(gòu)都在原子水平上得到解析。但像皰疹病毒這么大的病毒，由于電鏡技術(shù)的局限，還沒有辦法做到，我們研究組在計算方法的改進，總算解析了第一個這么大尺寸的皰疹病毒原子分辨率結(jié)構(gòu)，這個工作去年4月份發(fā)表在Science上。

 

　　培養(yǎng)皰疹病毒，分離純化出來后發(fā)現(xiàn)有三種形狀的顆粒，一種顆粒叫A顆粒，是空的，里面沒有基因組，B顆粒也是空的，也沒有基因組，但是有一點支架蛋白在里面。C顆粒是真正具有感染能力的，帶有完整基因組的顆粒。從尺寸上看，A、B、C三種顆粒幾乎一樣，差別就在于里面有沒有基因組，C顆粒在表面上還多了一種重要的復(fù)合物。

 

　　我們通過冷凍電鏡解析了A，B，C三種顆粒的結(jié)構(gòu)，通過結(jié)構(gòu)的比對和分析，A和B顆粒衣殼層結(jié)構(gòu)相似，C顆粒包含有序排列的基因組，除此以外C顆粒的五次軸附近結(jié)合了CVSC復(fù)合物。B顆粒，有一個特殊的通道叫Portal，里面沒有基因組，通道像瓶子一樣，里面是空的，沒有被封閉上；C顆粒充滿基因組，portal被UL25封閉。我們解析了B型顆粒結(jié)構(gòu)，是正二十面體的結(jié)構(gòu)，由4000多個蛋白質(zhì)亞基組成的大球，C顆粒多一個60個Copy的CVSC復(fù)合物。如下圖。

 

　　這個4000多個蛋白質(zhì)亞基組成的球，它們是如何高效有序地裝配的？

 

　　主要靠VP5蛋白。VP5蛋白有1000多個氨基酸殘基，主要通過下部的結(jié)構(gòu)構(gòu)象的變化相互作用組裝成穩(wěn)定的核衣殼結(jié)構(gòu)，其組成核衣殼結(jié)構(gòu)主要靠兩個手（結(jié)構(gòu)域），這個紅色標記的結(jié)構(gòu)域叫N-lasso，綠色標記的結(jié)構(gòu)域叫dimerizationdomain（二聚體化功能域）。這兩只手為了把蛋白裝成核衣殼，底部結(jié)構(gòu)域發(fā)生了顯著的變化以適應(yīng)局部的組裝微環(huán)境的差異，進而組裝成一個近似二十面體結(jié)構(gòu)，而上部的結(jié)構(gòu)域幾乎沒有變化。

 

　　下面這個結(jié)構(gòu)有點像故宮角樓的建筑，叫大木構(gòu)架斗拱結(jié)構(gòu)。

 

　　實際上是球的底部，它是由這些結(jié)構(gòu)組成的。這是一個五聚體，六聚體，這是一個C型的六聚體，它們之間是怎樣構(gòu)造的？首先看一下五聚體之間怎么構(gòu)造的，再看六聚體怎么構(gòu)造的，再看五聚體和六聚體之間怎么構(gòu)造的，再看六聚體和六聚體之間的結(jié)構(gòu)是怎么樣的。然后再分析一下三個六聚體之間是怎么構(gòu)建的。

 

　　看VP5底部兩個手怎么抓的，再看看其它的細部，這個是五聚體之間的構(gòu)造，側(cè)過來看β折疊像船子一樣都排起來，然后是六聚體之間的構(gòu)造，這就是為什么說它是architecture（建筑），它確確實實像4000個單元的房子一樣。

 

　　五聚體和六聚體之間的兩個平行的α螺旋，整個排下來，再側(cè)過來看，這種構(gòu)造是非常精細的，六聚體和六聚體之間的構(gòu)造，除了這個還有一堆α——helixcluster(α螺旋簇)，還有對稱的β折疊，再看三個六聚體之間是怎么結(jié)合的，實際上中間的洞里面還可以放一個三聚體在里面。

 

　　再回到瓶口，要看病毒口的結(jié)構(gòu)很難，它只占整個病毒球小于1%的面積，要解出它的原子水平的結(jié)構(gòu)非常有挑戰(zhàn)性。因為它沒有對稱性，挑戰(zhàn)性就非常大。不管怎么樣，我們用了AsymmetricReconstructions的方法解析了這個結(jié)構(gòu)。這個方法是怎么做的？這屬于很細節(jié)的事情了，這里就不展開講解了。根據(jù)解析出來的結(jié)構(gòu)作為藥物靶點，可以來設(shè)計抗病毒的藥物，由于數(shù)據(jù)還未發(fā)表，就先不說解析過程了。

 

　　這項工作是我們一批年輕的學(xué)生做出的，王祥喜博士是領(lǐng)頭的，袁帥解析了B顆粒，王佳靈解析C顆粒。楊云翔和楊盼解析了末端酶，王男解析了Portal，這些都是博士學(xué)生。